PCR耗材知识大科普,你想了解吗
发布日期:2022/11/1 9:54:34
PCR是一种敏感和有效的方法,用于在短时间内将单拷贝的目标DNA序列扩增至数百万拷贝。

因此用于PCR反应的塑料耗材必须避免存在污染物和抑制剂,同时又具有可保障最佳PCR效果的高质量。

01

塑料耗材组成

材料

PCR / qPCR耗材通常由聚丙烯制成,因为它是惰性的并且能够承受热循环过程中温度的快速变化。聚丙烯的惰性性质使其对于反应物质的吸收降低至最小,确保获取最佳的PCR结果。为了进一步保障在纯度和生物兼容性方面的批次间一致性,应当在生产过程中使用全新未循环使用的医学级或分子生物学级高品质聚丙烯原料。请注意,某些PCR / qPCR板边框用更强的聚碳酸酯框 制成,以与高通量机器人应用兼容。

颜色

PCR管和板通常可提供多种不同的颜色形式,以便于对于样品的视觉区分和鉴别,特别是在高通量实验中。尽管耗材的颜色对DNA扩增没有影响,但在设置实时PCR或qPCR 的反应时,与透明耗材相比,我们更推荐使用白色耗材,以实现灵敏和准确的荧光检测。

白色耗材通过阻止荧光折射出管(图2A)来提高qPCR数据的灵敏度和一致性。折射被最小化时,更多的信号被反射回检测器,从而增加信噪比(图2B)。此外,白色管壁可阻止荧光信号传递至PCR仪模块,避免被吸收或不一致地反射荧光信号,从而使重复实验(图1B)中的差异降至最低。在极少数情况下,如果荧光探测器由于白色孔的信号反射增强而过饱和,可以使用磨砂孔替代。

02

生产概况

防止灰尘和生物学污染物

为了避免可干扰DNA扩增的污染,PCR/qPCR塑料耗材应不含核酸酶和DNA的污染。尽管如高压和辐射等灭菌方法可去除细菌和DNA酶,但这些方法并不能去除灰尘和DNA残留。残留的灰尘客户可能会抑制PCR,而片段化的DNA依然可作为模板从而产生非特异性的扩增。

因此,在生产这些塑料耗材时,从制模到最终的包装都必须在具有颗粒数量限制的设施环境中进行。例如,100,000级洁净室允许在立方英尺空气中不超过100,000个直径≥0.5μm的颗粒。这些类型的设施符合国际标准化组织(如ISO 9001 )规定的严格指导原则,以防止灰尘和生物污染。

质量保证检验

为了确保质量,生产商可能需要对PCR/qPCR塑料耗材进行视觉或物理检验其完整性,以确保对于反应成分保护。可以执行物理测试来评估样品孔的蒸发,密封和电连续性以检查泄漏。对于生物测试,塑料耗材会进行某些DNA目标分子的qPCR扩增,以评估核酸酶和人类DNA的污染。生产商对于经历过这些严格检验的PCR/qPCR塑料耗材可提供相应的检测报告书。

声明:本文章来源的稿件均为转载,仅用于分享,如涉及版权等问题,请尽快联系我们,我们第一时间更正,谢谢!